免疫膠體(ti) 金銀細胞化學染色的固定劑選擇

免疫膠體(ti) 金銀染色和其它免疫細胞化學方法一樣，要想得到好的染色效果，關(guan) 鍵取決(jue) 於(yu) 標本處理是否合適，隻有使抗原性及組織結構保存的好，才能使以後的染色成功成為(wei) 可能，其次要用高特異性和價(jia) 的一抗，選擇合適的稀釋度。由於(yu) 免疫組化方法廣泛應用於(yu) 不同的生物學科，所要檢出的抗原種類繁多，性質也各不相同。因此，不可能有一種適用於(yu) 所有抗原的固定劑，而是根據不同的抗原性質區別對待。根據我們(men) 使用的固定劑介紹如下，供參考。

　　一、固定劑的選擇及固定時間（詳見表5-9）

　　（1）Karovsky's 液pH7.3。

　　（2）PAP液（Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative）

　　配製見附錄一。

表5-9 各種抗原固定劑的選擇及固定時間

待檢抗原	固定劑的種類	固定時間
蛋白質
酶	冰凍切片不固定，或用95%乙醇，B5固定液	10 min
激素	冰凍切片，塗片，印片，不固定或丙酮，甲	10 min
	醇，乙醇，PEG固定，B5固定液固定	4℃30 min
免疫球蛋白	中性福爾馬林，四氯化碳（1%甲醛）	30 min
白蛋白	95%乙醇含1～5%冰醋酸	30 min
纖維蛋白元	同上	30 min
病毒	丙酮，100%乙醇，甲醇，乙醚	30 min
糖蛋白	PLP，丙酮	30 min
脂質Forssman	中性福爾馬林	20 min
抗原	2.5%硫代硫酸鈉，冰凍切片不固定	20 min
免疫電鏡	PLP，戊二醛，戊二醛—多聚甲醛（Kacnovsky’s 液pH7.3）PEG、ECD-G等	30min

　　二、切片的處理與(yu) 粘附。

　　免疫組化染色過程較長，洗的次數很多，而且均在振蕩洗滌，抗原片附貼不緊，往往在zui後的時刻，還沒有等顯色就會(hui) 脫落導致前功盡棄，這個(ge) 環節　雖小卻會(hui) 影響大局，因此，為(wei) 了保證切片染色成功必須把切片處理好，解除掉片的後顧之憂