細胞生長曲線的測定實驗目的：

掌握繪製細胞生長曲線的原理和方法。

細胞生長曲線的測定背景與(yu) 原理：

生長曲線是測定細胞生長數的常用方法，也是判定細胞活力的重要指標，是培養(yang) 細胞生物學特性的基本參數之一。--般細胞傳(chuan) 代之後，經過短暫的懸浮後貼壁，隨後渡過長短不同的潛伏期，即進入快速生長的指數生長期。在細胞達到飽和密度後，停止生長，進入平台期，然後退化衰亡。為(wei) 了準確描述整個(ge) 過程中細胞數目的動態變化，需連續對細胞進行計數。通常計數6天。為(wei) 精確起見，一般每次實驗設3個(ge) 平行重複。

[材料、試劑與(yu) 儀(yi) 器]

1、實驗材料:

Hela細胞係。

2、實驗試劑:

DMEM培養(yang) 基(青黴素，鏈黴素，10%血清) ，0.25%胰蛋白酶溶液， 台酚藍染液。

3、實驗儀(yi) 器:

超淨工作台，CO2培養(yang) 箱，倒置顯微鏡，微量移液器，血細胞計數板，培養(yang) 瓶，離心管,移液管，廢液缸，蓋玻片, 24孔板。

[方法與(yu) 步驟]

1、取生長良好的細胞，用培養(yang) 基製成細胞懸液後計數。根據細胞計數結果按5x104/mL作傳(chuan) 代培養(yang) 接種於(yu) 24孔板中，共接種21孔細胞。1 m/孔。餘(yu) 下三孔可設傳(chuan) 代培養(yang) 的對照。

2、24h後每天記錄細胞數目，每次取3孔細胞，分別進行計數。計算平均值。連續計數7d。細胞用胰酶消化後加入一定量的培養(yang) 基,混勻製成細胞懸液。取少量懸液與(yu) 台酚藍1:1混台。取一幹淨的血細胞計數板,蓋上蓋片，從(cong) 蓋片兩(liang) 邊滴入細胞懸液使之充滿計數板和蓋片之間。注意滴液勿有氣泡，也不能太多，否則會(hui) 使蓋片浮起而使細胞計數不準。

3、低倍鏡下觀察，活細胞不著色，台盼藍著色的細胞呈深藍色，是不健康或已死亡的細胞，不能計數。

找出計數板上的方格，計算四角大格內(nei) 總細胞數，大格線者隻計左側(ce) 和上方，不計右側(ce) 和下方細胞懸液中細胞

密度計算公式為(wei) :細胞數/mL= (四角大格內(nei) 細胞數/4) x104x2

4、根據細胞計數結果，以單位細胞數(細胞數/mL)為(wei) 縱坐標，以時間為(wei) 橫坐標繪製生長曲線。

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