流式細胞分選技術實驗服務

一.服務介紹

流式細胞分選技術是利用流式細胞分選儀(yi) 。以高能量激光照射高速流動狀態下被熒光色素染色的單細胞或微粒，測量其產(chan) 生的散射光和發射熒光的強度，從(cong) 而對細胞(或微粒)的物理、生理、生化、免疫、遺傳(chuan) 、分子生物學性狀及功能狀態等進行定性或定量檢測的一種現代細胞分析技術，它可根據發射光的熒光強度和波長將發光顆粒亞(ya) 群分開並可實現單克隆分選，能複雜樣本中的細胞進行鑒定、分類.定量和分離，單次可同時對其中-種到四種特定細胞進行超高速分選純化、高通量單克隆分選或細胞芯片製備。分選後的細胞能直接用於(yu) 培養(yang) 、移植、核酸提取、單細胞PCR擴增或原位雜交等，可進一步進行細胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同細胞之間的差異化研究。硬件中樣本細胞丟(diu) 棄的比例低於(yu) 5%，保證樣本中目標細胞的高回收率。

二、實驗原理

當經熒光染色或標記的單細胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動室內(nei) 。流動室內(nei) 充滿鞘液,在鞘液的包裹和推動下，細胞被排成單列，以-定速度從(cong) 流動室噴口噴出。在流動室的噴口上配有一個(ge) 超高頻的壓電晶體(ti) ， 充電後振動，使噴出的液流斷裂為(wei) 均勻的液滴，待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負不同的電荷，當液滴流經過帶有幾千伏的偏轉板時，在高壓電場的作用下偏轉，落入各自的收集容器中，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器，從(cong) 而實現細胞的分離。

三、實驗流程(以分選有核紅細胞為(wei) 例)

1采抗凝血10 ml。

2.密度梯度分離單個(ge) 核細胞層

(1)在短中管中加入適量淋巴細胞分離液。

(2)取肝素抗凝靜脈血與(yu) 等量Hank's液或RPM11640充分混勻，用滴管沿管壁緩慢疊加於(yu) 分層液麵上,注意保持清楚的界麵。水平離心2000 rpmx20分鍾。

(3)離心後管內(nei) 分為(wei) 三層，上層為(wei) 血漿和Hank's液， 下層主要為(wei) 紅細胞和粒細胞。中層為(wei) 淋巴細胞分離液，在上、中層界麵處有一-以單個(ge) 核細胞為(wei) 主的白色雲(yun) 層狹窄帶，單個(ge) 核細胞包括淋巴細胞和單核細胞。此外， 還含有血小板。

(4)用毛細血管插到雲(yun) 霧層，吸取單個(ge) 核細胞。置入另-短中管中,加入5倍以上體(ti) 積的Hank's液或RPMI1640, 1500rpmx10分鍾，洗滌細胞兩(liang) 次。

3.免疫熒光染色

將上一步得到的單個(ge) 核細胞層按1x10/1的比例加入異硫青酸(FITC)標記的CD71單克隆抗體(ti) (鼠IgM).孵育30 min後重懸於(yu) 0.5 ml PBS液中進行熒光染色。

4.FACS分選CD71陽性細胞。

四、服務說明

1.客戶提供血液樣本。

2.公司提供圖片和分離後的細胞。

3.實驗周期為(wei) 2周左右，具體(ti) 根據實驗內(nei) 容而定。

五、質量承諾

提供清晰的圖片和分選後的細胞。

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