蛋白相互作用分析
蛋白質是細胞活性和功能的執行者,且蛋白質是依靠蛋白間相互作用執行功能的,因而研究蛋白的相互作用對於(yu) 研究細胞活
性和功能、解釋生命過程和現象具有重要意義(yi) 。
實驗意義(yi)
1.蛋白相互作用分析是研究蛋白功能的重要工具。
2.蛋白相互作用出現異常會(hui) 影響正常細胞的活性和功能,導致許多疾病的發生,比如神經退行性疾病和惡性腫瘤等,這對相
關(guan) 疾病的病理診斷以及臨(lin) 床治療研究具有重要意義(yi) 。
實驗原理
1. GST蛋白的表達:選擇合適的蛋白表達係統表達帶GST標簽的融合蛋白;
2.製備誘餌蛋白-GST融合蛋白裂解液:
3.通過穀胱甘肽親(qin) 和樹脂柱富集誘餌蛋白-GST融合蛋白,洗脫未結合的雜蛋白;
4.目標蛋白也可以通過蛋白表達係統進行表達純化;
5.將含有目標蛋白的混合物加入柱中與(yu) 親(qin) 和固定在柱上的誘餌蛋白相互作用從(cong) 而被吸附,洗脫未結合的雜蛋白;
6.用穀胱甘肽洗脫緩)衝(chong) 液將蛋白相互作用複合物洗脫下來;
7.通過SDS-PAGE和Western Blo或質譜進行檢測。
結果展示
實驗周期及交付標準
1.實驗周期: 3-5周
2.交付標準: WB檢測結果、載體(ti) 設計報告、實驗報告(試劑、 耗材、實驗步驟)、原始數據等
需確認信息
1.目的蛋白及信息
2.樣本種屬及類型
3.是否提供一抗.
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