斑點雜交實驗服務

實驗技術簡介:斑點雜交(Dotblot) 是將被檢標本點到膜上，烘烤固定。這種方法耗時短，可做半定量分析。- 張膜上可同時檢測多個(ge) 樣品，為(wei) 使點樣準確方便，市售有多種多管吸印儀(yi) (Manifold) , 如MinifoldI和II. Smart Botter(Wealtec).Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot,它們(men) 有許多孔，樣品加到孔中，在負壓下就會(hui) 流到膜上呈斑點狀或狹縫狀。反複衝(chong) 洗進樣孔，取出膜烤幹或紫外線照射以固定標本，這時的膜就可以進行雜交。

實驗技術原理:

斑點雜交是指將待測的DNA變性後點加在硝酸纖維素膜(或尼龍膜、NC膜)上, 用已標記的探針進行雜交，洗膜(除去未接合的探針)， 放射自顯影，判斷是否有雜交及其雜交強度，主要用於(yu) 基因缺失或拷貝數改變的檢測。

實驗操作流程:

1. DNA斑點雜交

①先將膜在水中浸濕，再放到15*SSC中。

②將DNA樣品溶於(yu) 水或TE，煮沸5min,冰中速冷。

③用鉛筆在濾膜上標好位置將DNA點樣於(yu) 膜上，每個(ge) 樣品-般點5ul(2~10μg DNA)。

④將膜烘幹，密封保存備用。

2、RNA斑點雜交

與(yu) 上法類似、，每個(ge) 樣品至多加10μg總RNA (經酚/氨0仿或異硫青酸胍提取純化)。 方法是將RNA溶於(yu) 5μl DEPC水，加5μI甲醛/SSC緩衝(chong) 液(10*SSC中含6.15moI/L甲醛) ，使RNA變性，然後取5-8μI點樣於(yu) 處理好的濾膜上，烘幹。

3、完整細胞斑點雜交

應用類似檢測細菌菌落的方法，可以對細胞培養(yang) 物的特異序列進行快速檢測，將整個(ge) 細胞點到膜上，經NaOH處理，使DNA暴露、變性和固定，再按常規方法進行雜交與(yu) 檢測。有人曾用此法從(cong) 105個(ge) 培養(yang) 細胞中檢測到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整細胞斑點印跡法可以用於(yu) 篩選大量標本，因為(wei) 它使細胞直接在膜上溶解，所以DNA含量甚至比常用的提取法還高，又不影響與(yu) 32P標記的探針雜交，但它不適用於(yu) 非放射性標記探針，因為(wei) DNA純度不夠，會(hui) 產(chan) 生高本底。

實驗注意事項:

客戶提供:

TotalRNA (DNA) ≥20ug,濃度> 1ug/ul, A260/A280>1.8;提供標記後的探針，需同時告知標記後探針的濃度及活性，待檢測目的基因的Genbank序列號。

交付標準:

1、圖片

2.完整項目報告(材料、試劑、儀(yi) 器、方法、數據分析、實驗結果)

其他:

1.點樣量不要太大，否則雜交後，X光片上點太大，互相影響。

點樣前尼龍膜無需預處理，點樣後自然晾幹後， 分別在變性液和中和液中進行變性和中和。

收費標準/服務周期/提供結果:

歡迎谘詢詳談，我們(men) 會(hui) 根據您的方案及需求製定詳細的服務協議。

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