平行反應監測技術(PRM) :

PRM是一種基於(yu) 高分辨、高精度質譜的離子監視技術，能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發生翻譯後修飾的肽段)進行選擇性檢測，從(cong) 而實現對目標蛋白質/肽段進行定量。PRM技術基於(yu) Q-Orbitrap為(wei) 代表的高分辨、高精度質譜平台，首先

利用四級杆質量分析器的選擇能力，用Q1選擇目標肽段的母離子,隨後在Collision cell中對母離子進行碎裂，後利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內(nei) 的所有碎片信息。這樣即可對複雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析。

實驗意義(yi) :

PRM技術是針對無抗體(ti) 蛋白的驗證新技術，用於(yu) label free, iTRAQ, TMT, SILAC等相對定量蛋白質組數據的驗證，或對複雜樣本中的目標蛋白質進行靶向定量分析。

實驗步驟:

用PRM進行蛋白質組數據驗證的一般步驟為(wei) :

結果展示

實驗完成周期及交付標準:

1.實驗周期: --般PRM時間為(wei) : 5-10天

2.交付標準:

組學驗證:

①主要儀(yi) 器、試劑和實驗方法。

②PRM目標離子信息:肽段序列和定量子離子。

③方法學重複性評價(jia) :三次技術重複的色譜峰麵積相對標準偏差(RSD) (預實驗結果) 。

④實驗結果:二級圖譜，XIC圖譜,原始峰麵積強度值，矯正後的相對表達量，兩(liang) 組樣本間的相對比值，ttest p值。

相對/定量:

①主要儀(yi) 器、試劑和實驗方法。

②PRM目標離子信息:肽段序列和定量子離子。

③方法學評價(jia) :相對定量的重複性評價(jia) -測試樣本的三次技術重複的色譜峰麵積相對標準偏差(RSD) (預實驗結果) ;

定量的方法學評價(jia) -標準品XIC圖譜，LOD， LOQ,線性範圍， 6個(ge) 稀釋梯度得到的標準曲線及線性公式(每個(ge) 稀釋度有3次技術重複)。

④實驗結果:

相對定量:二級圖譜，XIC圖譜,原始峰麵積強度值，矯正後的相對表達量，兩(liang) 組樣本間的相對比值，ttest p值。

定量:二級圖譜，XIC圖譜,原始峰麵積強度值，根據標準曲線計算得到的蛋白質濃度值，兩(liang) 組樣本間的相對比值，ttest p值。

需確認的信息:

1.樣品:

①如果樣品為(wei) 蛋白質溶液，蛋白質總量≥300mg;

②如果是組織樣品，樣品總量≥0.1g;如果是細胞樣品，細胞數量≥107個(ge) ;

③如果是體(ti) 液樣品，血清≥200ml，腦脊液≥200ml, 尿液≥1ml,淚液≥1ml。

2.樣品采集過程中使用到塑料製品時，盡量使用無色進口產(chan) 品，以減少塑料製品中雜質對質譜檢測的影響。

文獻參考

[1] Navin Rauniyar. Parallel Reaction Monitoring: A Targeted Experiment Performed Using High Resolution and HighMass Accuracy Mass Spectrometry. IntJ Mol Sci. 2015 Dec; 16(12): 28566- -28581.

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