細胞熒光染料標記檢測實驗

Zenon⑧標記技術為(wei) 製備熒光標記抗體(ti) 提供了一種快速、通用且可靠的實驗方法，此標記方法可利用各種熒光染料，並且起始原料可以為(wei) 極少量、未純化(如雜交瘤細胞的培養(yang) 上清液)的抗體(ti) 。利用Zenon@標記技術標記的抗體(ti) 適用於(yu) 所有可使用直標抗體(ti) 的應用領域。Zenon@ 標記技術的優(you) 勢包括:

●10分鍾貼記時間

●每個(ge) 標記1- 20微克抗體(ti)

●與(yu) BSA及其它穩定蛋白相容

●無純化步驟.

●靈活的抗體(ti) 標

Zenon⑧-標記技術如何工作

Zenon@標記技術提供一種多功能的、 易於(yu) 使用的方法，用於(yu) 標記人和小鼠的IgG1, lgG2a和lgG2b抗體(ti) 及兔gG抗體(ti) 。特殊設計的Zenon@片段隻結合一 抗的Fc片段， 這種快速、非共價(jia) 結合方法能夠迅速標記少量的一抗(圖1) Zenon@標記技術簡單高效;整個(ge) 標記步驟隻需10分鍾。

Zenon@抗體(ti) 偶聯物形成後可以穩定地儲(chu) 存待用;在使用前需要添加非特異性lgG來封閉未結合的Zenon⑨片段，無需柱純化。Zenon@複 合物因而可直接應用到樣品中。

Zenon@標記技術標記的抗體(ti) 與(yu) 觀察到的直接標記的抗體(ti) 偶聯物呈現相似的熒光強度或酶活性(圖2 )。

圖1. Zenon@標記技術工作原理。Zenon@抗體(ti) 的非共價(jia) 標記與(yu) 微量標記試劑盒、 單克隆標記試劑盒、蛋白標記試劑盒的共價(jia) 標記比較。

圖2. Zenon@標記技術生產(chan) 出的標記抗體(ti) 的高度相當於(yu) 或者比直接標記的抗體(ti) 更高。使用別藻藍蛋白(APC) 共軛標記或者使用1微克Zenon⑨APC複合物非共軛標記各種淋巴標誌物抗體(ti) 。然後,標記的抗

體(ti) 用於(yu) 人外周血淋巴細胞樣品的染色。製備Zenon@染色複台物時，通過提高Zenon@標記技術試劑與(yu) 所用一級抗體(ti) 的比例可進一步提高該複合物的亮度。

Zenon@標記技術:終標記靈活性

當您需要改變標記物顏色或者檢測特定熒光是否適合您的應用或抗體(ti) 時，Zenon@標記技術可提供*的標記靈活性。可廣 泛選擇的標記物、通用的標記技術，助您在流式細胞術(圖3 )和熒光成像(圖4和5 )中輕鬆獲得不同顏色組合成的多色應用圖像。

圖3.在流式細胞術中使用Zenon⑧標記技術。人外周血白細胞以下列三種抗體(ti) 染色:預先經Zenon⑧ Alexa Fluor@ 647小鼠IgG1標記試劑盒( Z25008)標記的抗CD3小鼠gG1抗體(ti) ( A21330 )、預先經Zenon⑨R藻紅蛋白小鼠IgG1標記試劑盒(Z25055 )標記的抗CD4小鼠gG1抗體(ti) (A21334)和預先經Zenon⑧Alexa Fluor@488小鼠lgG2a標記試劑盒( Z25102 )標記的抗CD8小鼠lgG2a抗體(ti) (A21338 )。圖A和圖B顯示:分別區別橙色熒光信號與(yu) 綠色熒光信號或者紅色熒光信號與(yu) 橙色熒光信號，可以將細胞進行區分，證明Zenon@標記的抗體(ti) 在同一樣品中不會(hui) 互相幹擾。分析樣品所用儀(yi) 器及設置為(wei) : Coulter Elite流式細胞儀(yi) ，針對藻紅蛋白和Alexa Fluor@488染料使用488 nm激發光，針對AlexaFluor⑧647染料使用633 nm激發光。

圖4.在熒光成像中使用Zenon@標記技術。

切取厚度為(wei) 14 μm的小鼠海馬冠狀切片，應.用Zenon⑧Alexa Fluor@ 488小鼠gG1標記試劑盒( Z25002 )標記的抗a-微管伯抗體(ti) ( A11126)染色。切片用NeuroTrace⑨530/615紅色熒光Nissl染料( N21482 )複染來觀察神經元胞體(ti) ，用Hoechst 33258 ( H1398，H3569,H21491 )染色來觀察細胞核。

圖5.在熒光成像中使用Zenon@標記技術。

微管蛋白和線粒體(ti) 探針標記的牛肺動脈內(nei) 皮細胞微管蛋白采用Zenon@ Alexa Fluor@488小鼠lgG2b標記試劑盒( Z25202 )標記的抗a-微管蛋白小鼠IgG2b單克隆抗體(ti) 檢測，線粒體(ti) 采用Zenon⑨Alexa Fluor@ 555小鼠lgG2b標記試劑盒( Z25205 )標記抗氧化磷酸化酶複合體(ti) V亞(ya) 單位a小鼠lgG2b單克隆抗體(ti) ( A21350 )檢測。使用DAPI(D1306，D3571, D21490 )給核酸染色。

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