人腎皮質近曲小管上皮細胞HK-2)
貨號：HUCL-013
細胞介紹
該細胞屬源於(yu) 正常腎的近曲小管細胞，通過導入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉錄病毒載體(ti) pLXSN 16 E6/E7轉染外生包裝細胞Psi-2，Psi-2細胞產(chan) 生的病毒再去感染兼嗜性包裝細胞係PA317，最後將PA317產(chan) 生的病毒顆粒導入正常的腎皮質近曲小管細胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新黴素抗性，但未用G418篩選轉導克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2細胞來源於(yu) 單克隆。PCR檢測證實HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因。
細胞特性
1） 來源：正常腎
2） 形態：上皮細胞樣
3） 含量：>1x106 個(ge) /mL
4） 汙染：支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌檢測為(wei) 陰性
5） 規格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存：使用含有優(you) 質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞後，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min後，於(yu) 潔淨操作台棄去上清，加入推薦使用的培養(yang) 基後轉移至10cm培養(yang) 皿或者T75培養(yang) 瓶中培養(yang) ，傳(chuan) 代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體(ti) 操作見細胞培養(yang) 步驟。
細胞用途：僅(jin) 供科研使用。
細胞培養(yang) 步驟
一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養(yang) 基(DMEM-H，GIBCO，貨號12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。（DMEM液體(ti) 培養(yang) 基：GIBCO，11995-065）。
2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yang) 基，10%DMSO，現用現配。液氮儲(chu) 存。
二． 細胞處理：
1） 複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yang) 基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。
2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
對於(yu) 貼壁細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後加入少量胰酶，細胞變圓脫落後，加入約1ml含血清的培養(yang) 基後加入凍存管中，再添加10%DMSO後進行凍存。
注意事項：
1. 收到細胞後，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。
2. 所有動物細胞均視為(wei) 有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台內(nei) 操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟(diu) 棄。
大鼠心肌細胞(H9c2)細胞培養(yang) 說明書(shu)
