產品簡介：

Trizol(總 RNA 提取試劑)

Trizol 是一種新型的用於(yu) 細胞或組織的總RNA提取試劑，Trizol采用不

Invitrogen TRIzol相似的原理和方法，其顏色、抽提的方法和步驟不後者*相同。

Trizol 含酚和異硫氰酸胍等物質，能迅速裂解細胞或組織並且滅活核酸酶，保持

RNA 的完整性。加入氯防仿並離心後，溶液形成上清層為(wei) 水相(無色)、中間層、下層為(wei) 有機相(紅色)。上清層用異丙醇沉澱回收總 RNA，中間層用乙醇沉澱回收 DNA，下層用異丙醇沉澱回收蛋白。

Trizol 適用於(yu) 從(cong) 各種組織或細胞中快速分離總RNA，既可用於(yu) 小量樣品(50～

100 mg 組織、5×10 細胞)，也可用於(yu) 大量樣品(>1g 組織/>10細胞)。提取的總RNA質

量高，可用於(yu) North⁶ern blot、Dot blot、polyA 篩選、體(ti) 外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆。本產(chan) 品具有以下特點：①適用範圍廣；②操作簡單，整個(ge) 過程 1 小時內(nei) 完成；③

純度高；④汙染少。

產品組成：

Trizol Reagent

100ml 4℃ 避光

自備材料：

1、試劑：無水乙醇、氯防仿、異丙醇、DEPC處理水等。

2、耗材：RNase 廣泛存在於(yu) 人的皮膚上和體(ti) 液及環境中，RNase 是導致 RNA降解的最主要物質，非常穩定。操作時應佩戴一次性口罩、手套、帽子。塑料製品、玻璃和金屬物品、 實驗儀(yi) 器等應清除 RNase，移液器吸頭、EP 管等製品的 RNase free處理尤為(wei) 重要。

3、儀(yi) 器：低溫高速離心機、低溫冰箱。

操作步驟(僅(jin) 供參考)：

1、樣品準備

⑴貼壁細胞：

①直接裂解：直接在培養(yang) 瓶/皿中加入 Trizol 裂解細胞，每 10cm 麵積加 1ml Trizol，用移液器吹打混勻。 ²

②胰蛋白酶消化：用無菌  PBS 洗滌細胞後，加入含有  0.05～0.25%胰蛋白酶的  PBS 處理細胞，當細胞脫離容器壁後，加入含有血清的培養(yang) 基終止反應，將細胞溶液轉移至無RNase 的離心管中，5000～6000g 離心 5 min，收集細胞沉澱，去除上清。收集細胞時一定要將細胞培養(yang) 液去除幹淨，否則裂解不*，降低 RNA收獲率。

⑵懸浮細胞：無需清洗細胞，直接 5000～6000 g 離心 5 min，收集細胞。每 5×10 ～10

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動⑶物組、織植：物取和新酵鮮母動細物胞或或者每植物1組0 織或細者菌-細7胞0℃加凍入存1組m織l ，Tr5i0z～o1l0。0mg 組織在液氮中充分研

磨或者加入  1ml Trizol 研磨或者用勻漿器勻漿處理。樣品體(ti) 積一般不超過  Trizol體(ti) 積的

10%。研磨要迅速，以 1min為(wei) 佳。

⑷血液：取 0.5～1 ml 新鮮或凍存的血液，12000g 離心 5 min，去除血漿，加入 1ml Trizol， 充分振蕩混勻。

2、核酸分離：充分振蕩混勻(可以置於(yu) 低溫/超低溫冰箱凍存 5～10 min 後，充分振蕩，反

複 1～3 次)，將裂解樣品或勻漿液室溫放置 5～10 min，使核蛋白不核酸*分離。

3、樣品分層：加入 0.2 ml 氯防仿/1ml Trizol，劇烈振蕩 15s，室溫放置 2～3 min。置於(yu) 4℃離心機，12000 g 離心 10～15 min。上層為(wei) 水相，中間層和下層為(wei) 有機相，RNA在上層水相。

4、沉澱 RNA：吸取上層水相(約  500μl)轉移至無 RNase 的離心管中(不要吸取任何中間層物質,否則會(hui) 有染色體(ti) DNA汙染)，加入等體(ti) 積異丙醇混勻(或者加入1.2倍體(ti) 積Trizol與(yu) 用  RNA沉澱液，超低溫冰箱放置 2～3hr,可以大大提高 RNA回收率），室溫放置 15～20 min。12000g 4℃離心 10min，離心後管側(ce) 或管底形成膠狀沉澱，棄上清。

5、洗滌 RNA：加入 1ml DEPC水配製的 75%乙醇/1ml Trizol洗滌沉澱(或者加入1ml

Trizol與(yu) 用RNA洗滌液，可以大大提高RNA純度），室溫放置5～10min，7500g 4℃離心5 min，棄上清。室溫幹燥5～10min，不宜過分幹燥，否則 RNA難以溶解。

6、溶解 RNA：加入30～50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA，-70℃長期保存或直接用於(yu) 後續試驗。對於(yu) 肝、胰腺、腎等組織中 RNase 含量高的樣品，沉澱時用100%去離子甲酰胺溶解。

分析與定量：

1、測定樣品在 260nm 和 280nm的吸收值確定  RNA 的質量。按  1OD=40pg RNA計算

RNA的產(chan) 率。OD260/280 在  1.8～2.0 視為(wei) 抽提  RNA 純度較好。濃度在 4μg/ml以上的樣品適於(yu) 用分光光度計測定。

2、進行甲醛變性瓊脂糖電泳，確定RNA的完整性和汙染情況。

3、核酸分析儀(yi) 測定RNA的質量和純度。

注意事項：

1、樣品保存：加入 Trizol 混勻後，樣品可在-70℃放置 1～2 月；RNA 樣品可以在 70%酒精中-70℃保存 2～4 周：如果需要長期保存，應置於(yu) 超低溫冰箱中保存。

2、Trizol是強腐蝕性物質，汙染皮膚或眼睛後，立即用清水或生理鹽水衝(chong) 洗，必要時尋求 醫生的幫助。

3、Trizol 可常溫運輸，建議保存 4℃保存。

4、為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。

有效期：12 個(ge) 月有效。

常見問題分析：

常見問題 可能原因

抽提得到的RNA沉澱未*溶解。

水相中混有有機相，從(cong) 而存在蛋白質和 DNA汙染。

A260/ A280＜1.6 RNA樣品用水而不是 TE溶解。低離子濃度和低 pH 條件下，A280值會(hui) 偏高。樣品勻漿時加的  Trizol 試劑太少，RNA 不蛋白質、DNA未能*分離。

勻漿後樣品未在室溫放置或者放置時間太短，RNA不核蛋白未*解離。

樣品中含組織溶劑(如乙醇等)或堿性溶液，致水相減少或 pH升高。

DNA 汙染

樣品勻漿時加入的試劑體(ti) 積太少。如果存在 DNA汙染，可用 DNA清除劑去除。水相中混有有機相，從(cong) 而存在蛋白質和 DNA汙染。

RNA 產(chan) 量低

RNA 降解

蛋白和多糖汙染

樣品裂解或勻漿處理不徹底，RNA沒有被*釋放出來。得到的 RNA沉澱未*溶解。

抽提的RNA中含有 RNase。

組織或細胞不新鮮，樣品沒有及時被液氮凍存，導致組織或細胞中的 RNA 降解。溶液或離心管未經 RNase free 處理，RNase 的汙染導致RNA被降解。

細胞在胰蛋白酶消化時間過長，導致未加  Trizol 前 RNA已經部分降解。

電泳時使用的甲酰胺 pH小於(yu) 3.5，導致 RNA發生酸解。水相中混有有機相，從(cong) 而帶有蛋白質和 DNA。樣品中蛋白、多糖含量高或樣品量太大，細胞未裂解*。