EASYspin 組織/細胞 RNA 快速提取試劑盒
EASYspin RNA Rapid Tissue and cell Kit
保存條件：本試劑盒在室溫儲(chu) 存 12 個(ge) 月不影響使用效果。
產(chan) 品介紹：
*的裂解液/β-巰基乙醇迅速裂解細胞和滅活細胞 RNA 酶，然後用乙醇調節結合條件後,RNA 在高離序鹽狀態下選擇性吸附於(yu) 離心柱內(nei) 矽基質膜， 再通過一係列快速的漂洗－離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物，蛋白等雜質去除，最後低鹽的 RNase free H20 將純淨 RNA 從(cong) 矽基質膜上洗脫。
自備試劑：乙醇, β-巰基乙醇注意事項：
1.需要自備一次性注射器，研缽。RA105 EASYspin 組織 細胞RNA快速提取試劑盒
-MBI2.裂解液RLT 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水衝(chong) 洗。
3.關(guan) 於(yu) DNA 的微量殘留：
一般說來任何總RNA 提取試劑在提取過程中無法*避免DNA 的微量殘留,本公司的EASYspin 係列RNA 提取產(chan) 品，在大多數 RT-PCR 擴增過程中極其微量的DNA 殘留（一般電泳 EB 染色紫外燈下觀察不可見）影響不是很大, 如果要進行嚴(yan) 格的
mRNA 表達量分析如熒光定量 PCR,我們(men) 建議在進行模板和引物的選擇時：
1） 選用跨內(nei) 含子的引物,以穿過 mRNA 中的連接區,這樣 DNA 就不能作為(wei) 模板參與(yu) 擴增反應。
2） 選擇基因組DNA 和 cDNA 上擴增的產(chan) 物大小不一樣的引物對。
操作步驟：
提示：
ð *次使用前請先在漂洗液 RW 瓶和 70%乙醇瓶中加入量無水乙醇!
ð 操作前在裂解液RLT 中加入β-巰基乙醇至終濃度 1%，如 1 ml RLT 中加入 10μl β-
巰基乙醇。此裂解液建議現用現配。配好的 RLT 4℃可放置一個(ge) 月。
1. 組織培養(yang) 細胞
a. 收集<107 懸浮細胞到一個(ge) 1.5ml 離心管，對於(yu) 貼壁細胞，孔板培養(yang) 可以直接裂解， 細胞瓶培養(yang) 應該先用胰蛋白酶消化後吹打下來收集。
b. 2,000rpm 離心 10 sec（或者 300g 離心 5 min），使細胞沉澱下來。*吸棄上清，留下細胞團，注意不*棄上清會(hui) 稀釋裂解液導致產(chan) 量純度降低。
c. 輕彈管壁將細胞沉澱*鬆散重懸， 加入 350μl（<5x106 細胞） 或者 600μl
（5x106-1x107 細胞）裂解液RLT，吹打混勻後用手劇烈振蕩 20 sec，充分裂解。
d. 用帶鈍針頭的一次性 1ml(配 0.9mm 針頭) 注射器抽打裂解物 5-10 次或直到得到滿意勻漿結果(或者電動勻漿 30 sec),可以剪切 DNA,降低粘稠度和提高產(chan) 量。
e. 接操作步驟項下 3。
2. 動物組織（例如鼠肝腦）
a. 電動勻漿： 新鮮組織用解剖刀迅速切成小碎塊, 加入 350μl(<20mg 組織) 或者
600μl(20-30mg 組織)的裂解液RLT 後電動*勻漿 20-40 sec。
b. 液氮研磨+勻漿：在液氮中研磨組織成細粉後，取適量組織細粉(20mg/30mg)轉入 裝有 350μl/600μl 組織裂解液 RLT 的 1.5ml 離心管中, 用手劇烈振蕩 20 sec，充分裂解。用帶鈍針頭的一次性 1 ml(配 0.9mm 針頭) 注射器抽打裂解物 10 次或直到得到滿意勻漿結果(或者電動勻漿30 sec),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高產(chan) 量。
c. 將勻漿後裂解物 12,000rpm 離心 3 min,沉澱可能存在的裂解困難的碎片或者不溶物,
將裂解物上清小心轉到一個(ge) 新離心管。
d. 接操作步驟項下 3。
3. 較精確估計裂解物(上清)體(ti) 積,加入等體(ti) 積的 70%乙醇（請先檢查是否已加入無水乙醇!）,此時可能出現沉澱,但是不影響提取過程,立即吹打混勻,不要離心。
4. 立刻將混合物(每次小於(yu) 700μl,多可以分兩(liang) 次加入)加入一個(ge) 吸附柱 RA 中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm 離心 60 sec，棄掉廢液。
5. 加 350μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 30 sec，12,000rpm 離心 30 sec，棄掉廢液。將吸附柱 RA 放回收集管中。
6. DNaseI 工作液的配製：取 10μl DNaseI 儲(chu) 存液放入新的 RNase-free 離心管中，加入
70μl RDD 溶液，輕柔混勻。
7. 向吸附柱 RA 中央加入 80μl DNaseI 工作液，室溫放置 15 min（一般情況下室溫放置可得到較好的消化效果，如果室溫效果不佳可選擇在 37℃放置 15 min）。
8. 加 350μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 30 sec，12，000rpm 離心 30 sec，棄掉廢液。將吸附柱 RA 放回收集管中。
9. 加入 500μl 漂洗液 RW（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心 30 sec，棄掉廢液。加入 500μl 漂洗液 RW,重複一遍。
10. 將吸附柱 RA 放回空收集管中，12,000rpm 離心 2 min，將吸附柱置於(yu) 室溫放置數分鍾，以*晾幹吸附材料中殘餘(yu) 的漂洗液。
11. 取出吸附柱 RA，放入一個(ge) RNase free 離心管中，根據預期 RNA 產(chan) 量在吸附膜的中間部位加30-50μl RNase free wate（r 事先在65℃水浴中加熱效果更好），室溫放置1 min，12,000rpm 離心 1 min。
