產(chan) 品簡介:
胰蛋白酶溶液(0.25%)
胰蛋白酶(Trypsin)是由胰髒產(chan) 生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸後,小腸內(nei) 的腸肽酶會(hui) 活化該酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點在於(yu) 已經活化的胰蛋白酶,能夠繼續活化更多胰蛋白酶原,這種過程即自動催化。胰蛋白酶在小腸工作,它會(hui) 將蛋白質水解為(wei) 肽,進而分解為(wei) 氨基酸,其最適溫度約為(wei) 37℃。Trypsin solution(0.25%)主要由 0.25%胰酶組成,不含 EDTA,經過濾除菌。本試劑可以直接用於(yu) 培養(yang) 細胞的消化,或者一些組織的消化,通常室溫下1min 左右就可以消化下大多數貼壁細胞。
產(chan) 品組成:
Trypsin solution(0.25%) 100ml -20℃
1、 PBS、Hanks 液或無血清培養(yang) 液
2、 顯微鏡
3、 離心機
操作步驟(僅(jin) 供參考):
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yang) 液,用無菌PBS、Hanks 液或無血清培養(yang) 液洗滌細胞一次,以去除殘餘(yu) 的血清。
②加入少量Trypsin solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min,不同的
細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,並且肉眼觀察培養(yang) 器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yang) 液,吹打下細胞,即可直接用於(yu) 後續實驗。
④如果發現消化不足,則加入Trypsin solution重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從(cong) 培養(yang) 器皿底部脫落, 直接用胰酶細胞培養(yang) 液把細胞全部吹打下來。1000~2000g離心1min,沉澱細胞,盡量去除胰酶細胞消化液後,加入含血清的*培養(yang) 液重新懸浮細胞,即可用於(yu) 後續實驗。
2、組織的消化
不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化後可以充分打散組織為(wei) 宜。
注意事項:
1、 盡量減少反複凍融的次數,以免失效。
2、在Trypsin solution 過程中,要特別注意避免消化液被細菌汙染。
3、Trypsin solution 消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板後生長狀況會(hui) 較差。
4、為(wei) 了您的安全和健康,請穿實驗服並戴一次性手套操作。
有效期: 12 個(ge) 月有效。