四環素

快速檢測試劑盒說明書(shu)

一、原理

本試劑盒采用間接競爭(zheng) ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物四環素將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭(zheng) 抗四環素抗體(ti) ，加入酶標記物後，用TMB底物顯色，樣本吸光值與(yu) 其所含殘留物四環素的含量成負相關(guan) ，與(yu) 標準曲線比較即可得出相應殘留物四環素的含量。

二、試劑盒特性

• 試劑盒靈敏度：  0.5ppb
• 孵育溫度：      25℃
• 孵育時間：      30min～15min
• 樣本檢測下限

豬肉、豬肝、雞肉樣本：

四環素                         10ppb

二甲an四環素                    15ppb

吡四環素                        15ppb

金黴素                           20ppb

脫甲基金黴素                      25ppb

土黴素                          35ppb

強力黴素                          40ppb

• 交叉反應率

四環素                         100%

二甲an四環素                        85%

吡四環素                         70%

金黴素                         50%

脫甲基金黴素                       42%

土黴素                         30%

強力黴素                      25%

• 樣本回收率

雞肉、豬肉、豬肝                   70%-120%

三、試劑盒組成

四、所用儀(yi) 器、試劑

具備的儀(yi) 器：酶標儀(yi) 、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、恒溫箱

微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道 30～300 µl

試      劑：濃鹽酸、氫氧化鈉

五、樣本前處理步驟

• 樣本處理前須知

（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。

（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否幹淨，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免汙染幹擾實驗結果。

• 樣本前處理需配製：

配液 1：0.2M 鹽酸

取 17.2ml 濃鹽酸加去離子水定容至 1L

配液 2：1 M 氫氧化鈉

稱 4g 氫氧化鈉固體(ti) 加去離子水定容至100ml

配液 3   樣本提取液

將20X 濃縮提取液與(yu) 去離子水 1:19 稀釋後用

• 組織樣本的處理方法

1、稱 2±0.05g 均質後的組織至50ml離心管中，加入3ml 0.2M鹽酸（見配液1），充分振蕩3min；

2、再加入600µl 1M 氫氧化鈉（見配液2）溶液和2.4ml樣本提取液（見配液3）溶液，充分振蕩3min，室溫4000r/min 以上離心 5min；

3、取50µl上層液進行分析。  

樣本稀釋倍數：4                           

六、 酶標免疫分析程序:

• 測定前應須知：

1、使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。

2、使用之後立即將所有試劑放回2～8℃。

3、在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決(jue) 於(yu) 洗板的*性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。

4、所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。

• 操作步驟：

• 從2～8℃冷藏環境中取出所需試劑，室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、 配製標準品

標準品6（40.5ppb）：

50µl 20X標準品（810ppb）用 950µl 標準品複溶液稀釋；

標準品5（13.5ppb）：

600µl 標準品複溶液與(yu) 300µl 標準品 6 混合；

標準品4（4.5ppb）：

600µl 標準品複溶液與(yu) 300µl 標準品 5 混合；

標準品3（1.5ppb）：

600µl 標準品複溶液與(yu) 300µl 標準品 4 混合；

標準品2（0.5ppb）：

   600µl 標準品複溶液與(yu) 300µl 標準品 3 混合；

標準品1（0ppb）：

直接使用標準品複溶液                                     

• 取出框架及需要數量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存於2-8℃。
• 配液：將15ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配製洗滌液。
• 編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，並記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
• 加標準品/樣本50µl/孔到各自的微孔中，然後加加入酶標記物50µl/孔再加入抗體工作液50µl/孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻。25℃環境中反應30min。
• 將孔內液體甩幹，用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板4～5次，每次間隔15～30秒，用吸水紙拍幹（拍幹後未清除的氣泡可用幹淨的槍頭刺破）。
• 顯色：加入底物A液50µl/孔，再加入底物B液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環境中避光顯色15min。
• 測定：加入終止液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀於450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，5min內讀數），測定每孔OD值。

七、結果判定

結果判定有兩(liang) 種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與(yu) 其所含四環素量成負相關(guan) 。

1、粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與(yu) 標準值比較即可得出其濃度範圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為(wei) 0.3，樣本2的吸光度值為(wei) 1.0，標準液吸光度值分別是：0ppb為(wei) 2.243； 0.5ppb為(wei) 1.816；1.5ppb為(wei) 1.415；4.5ppb為(wei) 0.74；13.5ppb為(wei) 0.313；40.5ppb為(wei) 0.155。則樣本1的濃度範圍是13.5ppb～40.5ppb；樣本2的濃度範圍是1.5ppb～4.5ppb，乘以其對應的稀釋倍數即為(wei) 樣本中四環素實際濃度。

2、定量分析

（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等於(yu) 標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以*個(ge) 標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B₀—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

（2）標準曲線的繪製與(yu) 計算

以標準品百分吸光率為(wei) 縱坐標，以四環素標準品濃度（ng/ml）的半對數為(wei) 橫坐標，繪製標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從(cong) 標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為(wei) 樣本中四環素實際濃度。

若利用試劑盒專(zhuan) 業(ye) 分析軟件進行計算，更便於(yu) 大量樣本的準確、快速分析。

八、 注意事項

• 室溫低於25℃或試劑及標本未回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
• 在洗板過程中如果出現板孔幹燥的情況，則會伴隨著標準曲線不成線性，重複性不好的現象。所以洗板拍幹後應立即進行下一步操作。
• 混合要均勻，否則會出現重複性不好的現象。
• 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
• 不要使用過了有效日期的試劑盒；稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化；不要交換使用不同批號的盒中試劑。
• 不用的微孔板放進自封袋重新密封；標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
• 顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之。標準品1的吸光度值小於0.5時，表示試劑可能變質。
• 該試劑盒zui佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。

九、儲(chu) 藏條件和保質期

• 儲藏條件：試劑盒於2-8℃保存，不要冷凍。
• 保 質 期：該產品有效期為1年，生產日期見包裝盒。

提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實驗結果，請放心使用。

新黴素檢測試劑盒

青黴素檢測試劑盒

氯黴素檢測試劑盒