堿性磷酸酶染色實驗服務

堿性磷酸酶染色實驗技術簡介:

堿性磷酸酶(AKP) 的顯示方法zui早由Gomeri (1939) 提出，現在這種方法稱為(wei) Gomeri法。堿性磷酸酶是指磷酸單酯酶I,它能在pH8. 6~10.0的zui適條件下分解磷酸單酯，對於(yu) 與(yu) 磷酸相接的醇基沒有特異性，Gomeri法是讓該酶在堿性條件下，分解甘油磷酸鈉，產(chan) 生磷酸根。

堿性磷酸酶染色實驗技術原理:

在一定條件下，使細胞中的酶作用於(yu) 酶的底物，使其產(chan) 物在原地進行捕捉、沉澱轉化為(wei) 有色產(chan) 物。細胞組織中的堿性磷酸酶在堿性(PH9.0- 9.6)環境下使作用液中的底物(a- 磷酸萘酚鈉)水解，產(chan) 生出a蔡酚，然後再與(yu) 偶氮鹽偶聯，生成不溶性的耐曬染料(zui終產(chan) 物的顏色因所用偶氮鹽的品種不同而有所不同)。

實驗操作流程:

1、取材、固定、包埋、切片;

2.取已粘好烘幹的切片兩(liang) 塊，放入二甲苯(一)→二甲苯(二) (各3-4分鍾) 的染缸中進行脫蠟，再經100%乙醇(一)- +100%乙醇(二) - -95%乙醇- -90%乙醇- -70%乙醇- -30%乙醇- +z水。 每級各一分鍾，在移切片時，用鑷子夾住切片震蕩並提起，放下反複幾次，在移入下-染缸邊緣前稍停留。讓溶液滴淨後,再入下一染缸，以免把上一染缸溶液過多帶入下-染缸，而影響切片質量;

3.將其中一塊切片以蠟筆作-標記(用作對照組切片)，放入沸水中煮沸5分鍾;

4.將兩(liang) 塊切片均放入AKP作用液中孵育30-60分鍾，作用液要事先預熱到37"C,水浴中進行:

5、取出切片在蒸餾水中洗滌;

6、放入硝酸鈷溶液2-3分鍾;

7.蒸餾水衝(chong) 洗幹淨，否則切片易被汙染，影響定位;

8、切片浸入硫化銨中2-3分鍾;

9.蒸餾水衝(chong) 洗幹淨;

10.經各級酒精脫水。即30%乙醇- -70%乙醇- -90%乙醇- -950%乙醇- -100%乙醇 (二)- -100%乙醇 (一)，各級一分鍾在顯微鏡下觀察，細胞中有黑色沉澱存在的地方，就表明有酶的存在。煮沸的對照切片無黑色沉澱。

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