免疫細胞化學ICC實驗服務

免疫細胞化學是將免疫學基本原理與(yu) 細胞化學技術相結合所建立起來的新技術,根據抗原與(yu) 抗體(ti) 特異性結合的特點，檢測細胞內(nei) 某種多肽、蛋白質及膜表麵抗原和受體(ti) 等大分子物質的存在與(yu) 分布。

一、 免疫細胞化學技術的概述

免疫細胞化學(immunocytochemistry, ICC)一是利用抗原與(yu) 抗體(ti) 特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體(ti) 的顯色劑(熒光素、酶、屬離子同位素)顯色來確定細胞內(nei) 抗原的成分(主要是多肽和蛋白質),

對其進行定位、定性及定量的研究，稱為(wei) ~。

(一)免疫細胞化學對抗原和抗體(ti) 的要求

1)具有特異性高和親(qin) 和力強的抗體(ti) 是實驗成功的首要條件。

對抗體(ti) 的要求: 純度高、比活性強;

2) 高度特異性抗體(ti) 的獲得，取決(jue) 於(yu) 抗原的純度。

對抗原的要求:純度高，免疫原性強，穩定無變化。

(二)免疫細胞化學抗原(antigen, Ag)

1)抗原的概念:凡是在機體(ti) 內(nei) 引起體(ti) 液兔疫和(或)細胞免疫反應的物質，稱為(wei) 抗原。抗原具有兩(liang) 個(ge) 方麵的

特性:

①免疫原性:引起機體(ti) 產(chan) 生抗體(ti) 和(或)致敏淋細胞的特性;

②免疫反應性:抗原能與(yu) 相應的抗體(ti) 及致敏淋巴細胞發生特異的結合或反應的特性。

2)根據抗原是否顯示免疫原性分為(wei) :

①*抗原:分子量較大，-般在10kDa以上,並具有較複雜的化學組成。免疫原性zui強的是蛋白質抗原，多糖次之;脂類和核酸必需和蛋白質及多糖形成複合物才具有良好的免疫原性。

②半抗原:又稱為(wei) 不*抗原，分子量較小。例如:某些短肽、多糖、類脂和藥物等。半抗原必需與(yu) 載體(ti) 結合，才能獲得免疫原性。

免疫細胞化學載體(ti)

通常是具有高度免疫原性的大分子物質，具有將免疫原性傳(chuan) 遞給耦聯的半抗原能力。

①常用的載體(ti) 有鑰孔血藍蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)、 牛血清白蛋白(bovine serumalbumin, BSA).卵白蛋白(Ovalbumin, OVA)等。

②戊二醛或碳化二亞(ya) 胺作為(wei) 交聯劑通過功能基團-NH2、-COOH等將半抗原結合到載體(ti) 上。結合比例為(wei) 5kDa結合5 ~ 25個(ge) 分子的小肽。

(三)抗體(ti) (antibody, Ab)

1.抗體(ti) 的概念:

①機體(ti) 受到抗原刺激後，由漿細胞合成並分泌出一類具有與(yu) 抗原發生特異性結合的球蛋白，被稱為(wei) 抗體(ti) 。

②抗體(ti) 主要存在於(yu) 血清內(nei) ;

③抗體(ti) 都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白並不-定都是抗體(ti) 。

④免疫球蛋白根據重鏈的結構及抗原特異性不同分為(wei) 五種，既lgG、lgD、 lgE、 lgA. IgM.

2、兔疫組化實驗中常用的抗體(ti) :單克隆抗體(ti) 和多克隆抗體(ti) 。

①單克隆抗體(ti) :是一個(ge) B淋巴細胞克隆分泌的抗體(ti) ，是應用細胞融合雜交瘤技術免疫動物製備的。特異性強、抗體(ti) 產(chan) 量高。

②多克隆抗體(ti) :是將純化後的抗原直接免疫動物後，從(cong) 動物血中所獲得的免疫血清，是多個(ge) B淋巴細胞克隆所產(chan) 生的抗體(ti) 混合物。

-特異性低，會(hui) 產(chan) 生抗體(ti) 的交叉反應。

-多克隆抗體(ti) 廣泛應用於(yu) 石蠟包埋組織切片，可減少假陰性染色機會(hui) 。

-抗原與(yu) 抗體(ti) 的結合，要求量保持一定比例， 當抗原或抗體(ti) 過量時，是不能聚合成大顆粒。

3、抗體(ti) 的製備一多克隆抗體(ti) 的製備

①動物的選擇

②佐劑(adjuvant)

③免疫方法

④免疫劑量

⑤抗體(ti) 效價(jia) 的測定

⑥放血或定期抽血

選擇什麽(me) 動物來免疫取決(jue) 於(yu) :

(1)動物的選擇

①所需抗血清的量

小鼠隻能提供1.0 ~ 1.5ml的血液，而山羊能提供幾升。

②能供免疫用的抗原量小鼠50mg足夠，而山羊需要幾毫克。

③動物的品係:免疫動物與(yu) 提供抗原的動物之間的種係差異越大越好。

例如哺乳動物的抗原可選擇非哺乳動物來製備抗體(ti) 。

常用的動物有兔、羊、馬、豬等,以兔(新西蘭(lan) 兔，年輕，健壯,體(ti) 重在2 .5kg左右,雄性)為(wei) zui常用。

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