單克隆抗體(ti) (MAb)是針專(zhuan) - -的抗原決(jue) 定簇產(chan) 生的抗體(ti) ，單克隆技術又名雜交瘤技術起源於(yu) 1975年，由G. KOhler和Milstein創立。主要原理是利用產(chan) 生抗體(ti) 的B細胞與(yu) 腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產(chan) 抗體(ti) 。

雜交瘤技術製備單克隆抗是針對體(ti) 的主要步驟包括:

(1 )抗原製備，

(2)免疫動物,

(3)免疫脾細胞和骨髓瘤細胞的製備,

(4)細胞融合;

(5)雜交瘤細胞的選擇培養(yang) ，

(6)雜交瘤細胞的篩選;

(7)雜交瘤細胞的克隆化;

(8)單克隆抗體(ti) 的檢定;

(9)分泌單克隆抗體(ti) 雜交瘤細胞係的建立:

(10)單克隆抗體(ti) 的大量製備。

單克隆抗體(ti) 的製備過程:

1、免疫動物免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chan) 生致敏B淋巴細胞的過程。一般選用6- 8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預先製定的免疫方案進行免疫注射。抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，並分化成為(wei) 致敏B淋巴細胞。

2、細胞融合采用眼球摘除放血法處死小鼠，無菌操作取出脾髒，在平皿內(nei) 擠壓研磨，製備脾細胞懸液。將準備好的同係骨髓瘤細胞與(yu) 小鼠脾細胞按一定比例混合, 並加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作下，各種淋巴細胞可與(yu) 骨髓瘤細胞發生融合，形成雜交瘤細胞。

3、選擇性培養(yang) 的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般采用HAT選擇性培養(yang) 基。 在HAT培養(yang) 基中，未融合的骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶，不能利用補救途徑合成DNA而死亡。未融合的淋巴細胞雖具有次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶，但其本身不能在體(ti) 外長期存活也逐漸死亡。隻有融合的雜交瘤細胞由於(yu) 從(cong) 脾細胞獲得了次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶，並具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養(yang) 基中存活和增殖。

4、雜交瘤陽性克隆的篩選與(yu) 克隆化在HAT培養(yang) 基中生長的雜交瘤細胞，隻有少數是分泌預定特異性單克隆抗體(ti) 的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養(yang) 。采用靈敏、快速、特異的免疫學方法，篩選出能產(chan) 生所需單克隆抗體(ti) 的陽性雜交瘤細胞，並進行克隆擴增。

經過全麵鑒定其所分泌單克隆抗體(ti) 的免疫球蛋白類型、亞(ya) 類、特異性、親(qin) 和力、識別抗原的表位及其分子後，及時進行凍存。

5、單克隆抗體(ti) 的大量製備單克隆抗體(ti) 的大量製備重要采用動物體(ti) 內(nei) 誘生法和體(ti)

外培養(yang) 法。

(1)體(ti) 內(nei) 誘生法取Balb/c小鼠，首先腹腔注射0. 5ml液體(ti) 石臘或降植烷進行預處理。1-2周後，腹腔內(nei) 接種雜交瘤細胞。雜交瘤細胞在小鼠腹腔內(nei) 增殖，並產(chan) 生和分泌單克隆抗體(ti) 。約1-2周，可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體(ti) 。

(2)體(ti) 外培養(yang) 法將雜交瘤細胞置於(yu) 培養(yang) 瓶中進行培養(yang) 。在培養(yang) 過程中，雜交瘤細胞產(chan) 生並分泌單克隆抗體(ti) ，收集培養(yang) 上清液，離心去除細胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體(ti) 。但這種方法產(chan) 生的抗體(ti) 量有限。近年來,各種新型培養(yang) 技術和裝置不斷出現，大大提高了抗體(ti) 的生產(chan) 量。雜交瘤細胞融合後，要進行篩選後才能使用。雜交瘤細胞分為(wei) 兩(liang) 次:一、篩選出雜交瘤細胞;二、 在初選的雜交瘤細胞中篩選出能產(chan) 生特異性抗體(ti) 的雜交瘤細胞，這兩(liang) 次篩選的方法和原理各不相同。

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